实验准备

实验步骤

1. 首先，从培养箱中取出培养皿，使用显微镜观察细胞的状态，包括细胞密度、形态以及贴壁情况等。
2. 在超净台内，放置预热好的培养基、PBS和胰酶。点燃酒精灯，对培养皿口进行灭菌，并将原有培养基吸走。
3. 进行清洗：向培养皿底部加入7mL的PBS（根据细胞状态适量调整），轻柔摇动以清洗细胞。
4. 消化步骤：观察到细胞及杂质随着PBS清洗下来后，吸走PBS，加入3mL的胰酶，并静置5分钟（时间和胰酶用量可根据细胞类型调整）。
5. 在5分钟后检查细胞是否已被充分消化。
6. 如细胞消化完全，向底部添加7mL的培养基（根据细胞密度判断），以终止消化过程。使用移液枪轻轻吹打，使壁上残留的细胞脱落，均匀后取出少量进行计数。
7. 根据需求稀释细胞，待细胞悬液覆盖共聚焦爬片表面后，将其置入培养箱中，约30分钟后细胞将附着在爬片上，此后沿内壁添加培养基，继续培养。
8. 培养完成后，仔细吸去废液，使用镊子夹住支架侧面，以取出支架。
9. 最后，双手夹住支架两侧，轻拉即可顺利取出爬片，随即继续下一个培养实验。

注意事项

• 在操作培养皿时，注意保证液体不沾到瓶口，每次打开瓶口时都需进行灭菌处理。
• 避免其他物品从开启的培养皿上方经过，以预防污染。
• 由于贴壁细胞较为脆弱，所有放入培养皿的液体都需在37°C下预热。
• 在倾斜超过30°取出共聚焦爬片时，要轻拉，以防止在拉开瞬间爬片掉落或破裂。
• 需注意，尊龙凯时品牌共聚焦爬片为一次性产品，不可重复使用，且爬片有正反面，拆开后应迅速使用。