人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养指南

尊龙凯时为您提供人胰腺癌细胞HPAFⅡ的全面培养说明，确保您能在最佳条件下培养细胞，获得理想的实验效果。

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM培养基+10% FBS+1%丙酮酸钠+1% L-谷氨酰胺+1% P/S
传代方法：首次建议1:2传代，培养后每两天更换培养基。

备注：使用无菌离心管收集瓶中培养基，留作过渡对比培养，若对比效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理及培育

收到细胞后，待其达到良好状态后，再用完全培养液灌满细胞瓶并密封。最佳运输方式为：用75%酒精消毒整个细胞瓶后，放在超净台内进行无菌操作，将细胞瓶置于37℃、5% CO₂培养箱内静置3-4小时以稳定细胞状态。显微镜下观察细胞生长情况，并拍照保存不同倍数的细胞状态（40x,100x,200x各一张）。前三天的照片是重要依据，如未提供照片则默认细胞状态良好。

（传代后建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基以便进行对比。换液时，瓶盖需稍微松开。）

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：
如果未超过80%汇合度，将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO₂孵箱培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞变圆并脱落，迅速取出并轻敲培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 温和吹打细胞使其完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO₂培养箱中培养。

b、细胞冻存：
1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 加入约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞状态待其变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管；
4. 将冻存细胞直接置入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃存放24小时以上。

c、细胞复苏：
1. 从液氮取出冻存管，快速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶，用75%酒精擦拭外壁；
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO₂培养箱中；
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中可能会出现细胞脱落的现象，属于正常情况。如脱离较多，可将培养液收集于离心管，1000rpm离心5分钟以进行过渡培养。再用1-2ml胰蛋白酶轻吹重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，再离心，弃去上清，重悬后按1:2比例分瓶传代。最后补充新的完全培养基，并放入37℃、5% CO₂培养箱中培养。

五、售后条款

尊龙凯时为您提供周到的售后服务，确保细胞使用无忧：

1）细胞若出现问题，可重发的情况包括：运输途中遇到的细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等；细胞污染需在收到产品48小时内提供真实实验结果进行核实；常温发货细胞静置24小时后未存活，需提供清晰的细胞状态照片；若细胞复苏后出现污染，需及时沟通；若活性问题需在收到产品7天内提供鉴定结果，核实后重发。

2）不予重发的情况包括：客户造成的细胞污染、客户不当操作导致细胞状态不好、使用非推荐培养体系及未提供细胞培养前3天照片等情况。

如您有任何疑问，欢迎联系尊龙凯时客户服务，我们将竭诚为您提供帮助。