### 支原体概念及污染影响

支原体（Mycoplasma），也被称为霉形体，是现今已知的最小、最简单的无细胞壁原核生物，其直径在0.1至0.3微米之间，具有高度多形性并能通过滤膜。作为常见的细胞培养污染物，支原体在哺乳动物细胞培养中难以被检测到。由于其能形成丝状和分枝形状，因此被命名为支原体。

在生物学分类中，支原体属于柔膜菌门、柔膜菌纲，并分属多个目、科、属。其中研究较多的支原体目和支原体科，主要包括支原体属和脲原体属。支原体污染对细胞培养造成多方面的不良影响，这已成为细胞培养中的一个严重问题。保守估计，常规细胞培养中的支原体污染率在15%到35%之间，严重影响实验结果的可信度。

在细胞培养中，约95%的支原体污染主要由莱氏无胆甾原体、精氨酸支原体、口腔支原体、发酵支原体、人型支原体和猪鼻支原体引起。这些污染在培养基中形成“煎鸡蛋”形状的菌落。支原体适合在细胞培养上清和细胞膜中生长，并能穿透宿主细胞膜。

支原体污染的主要来源包括细胞培养液或其成分（如培养基原料、血清和其他试剂）、实验室操作人员、细胞培养箱、液氮培养箱、空气中的颗粒和气溶胶、抗生素的过度使用、密封不当的细胞培养物和已被支原体污染的细胞等。

支原体污染带来的危害包括：导致细胞制品或以细胞为介质的产品在下游纯化过程中由于未能有效去除支原体而造成批次报废，污染接触的所有相关设备，导致其他正常细胞受到支原体污染，重要细胞或病毒种子库遭受支原体污染而报废，实验室整体环境被污染并被迫停产或实验操作进行支原体去除，还可能导致支原体产生耐受性，扩大的污染面积对实验室中的其他细胞培养物造成威胁。

因此，定期进行支原体检测和去除，以确保细胞培养体系内无支原体的存在，是保障科学研究正常进行的必要措施。

### 支原体检测方法介绍

在生物制药和细胞研究领域，支原体污染是一个严重的问题，因为它可能影响实验结果和产品质量。因此，支原体检测对于确保细胞培养物和生物制品的安全性和可靠性至关重要。

目前常用的支原体检测方法包括：培养法、PCR（聚合酶链式反应）法、荧光染色法、ELISA（酶联免疫吸附试验）法、qPCR（实时定量PCR）、代谢活性测定（例如ATP酶法）等。不同支原体检测方法的优缺点如下：

为了建立合适的支原体检测方法，需要考虑检测结果的用途（如是否用于产品放行）、是否符合药典要求、是否经过验证确认了灵敏度、专属性和耐用性等。如果支原体检测关系到产品放行，则需按照药典规定的方法进行，如培养法或指示细胞法，或者经过验证与药典方法可比的NAT法（例如qPCR法）。如果是日常检测或研发早期细胞的支原体检测，则可优先采用快速支原体检测方法，包括巢式PCR法、LAMP等温扩增法、qPCR法、ATP酶法和ELISA法。

### 支原体PCR检测试剂盒（巢式PCR）介绍

基于NAT（核酸扩增技术），尊龙凯时开发了多款支原体快速检测试剂盒，包括荧光探针qPCR法支原体检测试剂盒、一步恒温显色法支原体检测试剂盒和巢式PCR法支原体检测试剂盒。支原体PCR检测试剂盒（巢式PCR）主要用于检测各种生物材料（如细胞培养物、实验动物分泌物和动物血清等）中的支原体感染。

该试剂盒利用定量PCR技术，针对支原体的16S-23SrRNA序列保守区域设计了两套引物，进行两轮PCR扩增，以第二轮产物为准进行支原体污染判断。它可以检测包括口腔支原体、肺炎支原体等在内的34种支原体，灵敏度高达25 copies/μL，适用于细胞培养上清液检测，具有特异性强、灵敏度高和操作方便简单等特点。

该产品相比于常规PCR法支原体检测试剂盒，能有效避免引物与模板之间的非特异性配对导致的假阴性结果，并能灵敏检测样本中微量的支原体DNA，确保科研及应用的有效性。尊龙凯时提供的支原体检测试剂盒是日常检测和早期研发细胞的首选产品，确保细胞培养的安全和高效。