《实验室》师弟：师姐，救命啊！我最近在做免疫荧光实验，快要崩溃了！昨天培养的HUVEC细胞在染色时一洗就全掉了，今天更离谱，居然用移液枪轻轻加入试剂，结果隔壁孔的FITC信号串到了这边，现在数据根本没法用！

师姐：我明白你的感受，去年我做血管生成实验时也遇到过这样的情况，花费了三个月结果一直染色不好。细胞脱落是由于普通载玻片的表面处理不当，荧光信号串扰则是因为传统8孔板的孔间距过小，尤其是样本量增大时，基本上是没法补救了。

师弟：我记得当时你还需要保持长时间观察活细胞动态，你最后是怎么解决的？求求你告诉我！

师姐：其实很简单，我用的是尊龙凯时的ibidi8孔高壁腔室载玻片……如果在细胞培养过程中，你也碰到诸如细胞脱落、状态不佳或染色不均匀等问题，赶紧试试尊龙凯时的ibidiµ-Slide8孔高壁腔室载玻片吧！我们为大家准备了一份详细的「案例指南」，它涵盖了如何利用ibidiµ-Slide8孔高壁腔室载玻片培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）并进行免疫荧光染色，这个方案同样适用于其他贴壁细胞。

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使用ibidiµ-Slide8孔高壁腔室载玻片培养HUVEC并进行免疫荧光染色时，请注意以下关键因素以确保实验准确性与可靠性：1. 包括但不限于细胞密度、细胞培养容器的几何形状以及基质/涂层等；2. 为确保染色效果，需设置阳性与阴性对照。因此，我们强烈建议在实验之前进行充分的文献调研，以控制实验条件，以获取完美可靠的实验结果。

1. 细胞培养：使用HUVEC细胞（C-12203，Promocell）和胶原蛋白IV（354233，Corning）；培养基为内皮细胞基础培养基（C-22210，Promocell）和内皮细胞生长培养基补充剂（C-39215，Promocell）；使用磷酸盐缓冲液（14190144，Gibco）和Accutase细胞解离液（A1110501，Gibco）。

2. 免疫荧光染色：磷酸盐缓冲液（14190144，Gibco）、10%福尔马林（HT5011，SigmaAldrich）、单克隆抗α-微管蛋白抗体（T5168，SigmaAldrich）、抗小鼠IgG-Atto594抗体（76085，SigmaAldrich）、鬼笔肽488缀合物（ab176753，Abcam）、ibidi含DAPI封片剂（50011，ibidi）、Triton-X-100破膜剂（A16046，Thermo Fisher Scientific）、透化缓冲液（0.5% Triton-X-100，PBS）、封闭缓冲液（1%BSA+0.2% Triton-X-100，PBS）、抗体稀释缓冲液（1%BSA+0.05% Triton-X-100，PBS）及牛血清白蛋白（BSA）（A1470-10G，SigmaAldrich）和尊龙凯时镜油（50101，ibidi）。

3. 实验步骤：在使用ibidiµ-Slide8孔高壁腔室载玻片之前，请详细阅读并遵循使用说明，确保在无菌条件下进行。首先在培养瓶中培养HUVEC，并确保细胞能够正常附壁。接着，使用Accutase解离HUVEC，离心后重悬计数，最后按需调整细胞密度至2×10^5 cells/mL，然后将细胞悬液加入腔室中，覆盖后在培养箱中孵育以使细胞贴壁。

4. 细胞固定、破膜及封闭：加入福尔马林固定细胞，吸掉并用PBS洗涤，然后加入透化缓冲液孵育，最后用封闭缓冲液处理细胞。

5. 荧光染色：在封闭步骤期间，准备抗体稀释缓冲液，依照比例稀释一抗，然后加入孵育，接着依次洗涤，再加入二抗进行处理，最后加入DAPI封片剂并低温储存。

6. 镜检成像：使用荧光显微镜在适当条件下进行观察。

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