尊龙凯时大鼠肝星形细胞THSC培养指南旨在为研究人员提供细胞培养的详细步骤和注意事项，以确保细胞的健康生长和高效利用。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肝星形细胞THSC
生长特性：无血清冻存液，培养体系为DMEM。
冻存条件：无血清冻存液。
传代方法：建议首次传代比例为1:2，每2天更换培养基。

备注：请使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比实验。如对比效果不佳，建议直接使用尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，培养至良好状态，将完全培养液灌满瓶子并封口，这是运输细胞的最佳方法。使用75%酒精消毒细胞瓶，放入超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后进行后续处理。显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为售后服务的重要依据。如不提供照片，则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%汇合度，请将培养液收集至离心管中，保留5ml用于培养；如果细胞密度超过80%，可以进行传代，具体步骤如下：

1. 去除培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞脱落情况。
3. 若细胞大部分变圆并脱落，迅速终止消化，加入5ml以上的完全培养基。
4. 轻轻吹打，使细胞完全脱落后，吸出悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃上清，重悬于1-2ml完全培养基中。
5. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至5-8ml/瓶，置于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞脱落后，加入5ml完全培养液终止消化。
3. 转移悬液至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃上清，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液混匀后放入冻存管中。
4. 直接将冻存细胞放入-80℃冰箱中，若需转入液氮罐，请在-80℃保存24小时以上再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻结细胞管，快速置入37℃水浴中解冻，直至管中无结晶，外壁用75%酒精消毒。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清后，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放于37℃、5%CO2细胞培养箱中。
4. 第二天，更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞可能贴壁不牢，在运输过程中会有所脱落，属于正常现象。如脱离细胞较多，可以将所有培养液收集至离心管中，进行适当处理。在培养过程中，若存在问题请及时与技术人员沟通。

五、售后条款

1. 细胞出现问题时可重发的情况包括：运输过程中细胞丢失、污染等；若在收到产品48小时内提供真实的实验结果，并经核实后可重发。
2. 不予重发的情况包括：客户自行造成的污染或操作不当等。

我们真诚希望通过以上步骤和注意事项，能够帮助您在使用尊龙凯时大鼠肝星形细胞THSC时获得最佳实验效果。