猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）依然是影响全球养猪业的重要传染病之一。最近在西班牙东北部发现的高致病性PRRSV-1毒株（疫情首次在2020年被检测到），为疾病控制带来了新的挑战。尽管这些致病株在田间造成了严重后果，其具体的实验特性仍未得到充分探讨。本研究聚焦于西班牙出现的高致病性PRRSV-1毒株Lleida029_22，开展了遗传溯源、体外复制特性及双感染途径（肌肉注射/滴鼻）致病机制的系统研究。

近期发表于《Wiley Online Library》的研究分析了Lleida029_22毒株的遗传特征与其致病性。系统发育分析结果表明，Lleida029_22毒株属于与PRRSV-1 Rosalia疫情相关的新分支，并与意大利的高致病毒株PR40具有同源关系。该毒株在体外能有效复制于猪肺泡巨噬细胞（PAM）与PAM-KNU细胞，但无法在MARC-145细胞中进行复制。

为了评估其致病性，研究通过肌肉注射（IM）和鼻内喷雾（IN）两种途径给予8周龄的仔猪接种相同剂量的Lleida029_22菌株，结果显示IM接种组在14天内100%死亡，伴随着高病毒血症、显著升高的促炎细胞因子（尤其是IL-6）水平及严重的肺部病变。相比之下，IN接种组的死亡率为30%，临床症状较轻，存活猪在63天后康复，但仍表现出长期的病毒血症和排毒现象，且促炎细胞因子和中和抗体的水平较低。值得注意的是，IN感染似乎真实再现了西班牙农场由高致病性Rosalia毒株引发的疫情，而IM感染则强调了医源性传播所带来的风险。

研究背景

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是全球养猪业的重要病原体，具有高变异性和多样性，使得现有疫苗效果不稳定。2020年，一种名为“Rosalia”的高毒力PRRSV-1病毒株在西班牙出现，并迅速传播，造成了巨大的经济损失。遗传分析显示，这一病毒株可能源于意大利的高毒株PR40，经过变异和重组产生。

研究目的与方法

本研究的目的在于通过体外与猪体实验，全面表征从Rosalia疫情分离出的高致病性PRRSV-1毒株。特别地，研究采用了肌肉注射（IM）和鼻内接种（IN）两种感染途径，以模拟这两种不同的感染方式。

在研究过程中，详细记录了临床症状与死亡率，并对死亡或剖检猪进行了系统的病理检查。通过检测血清、唾液、鼻拭子、直肠拭子及组织中的病毒载量，分析PRRSV特异性抗体、中和抗体及血清细胞因子的水平，以评估免疫反应。该研究将为评估现有疫苗的有效性、开发新疫苗以及深入理解高致病性毒株的致病机制提供重要的实验模型和数据。

材料与方法

本研究所用的细胞株包括从5周龄仔猪肺灌洗液中获取的原代肺泡巨噬细胞（PAMs）、来自Applied Biological Materials公司的永生化PAM-KNU细胞及非洲绿猴肾细胞（MARC-145）。研究使用的PRRSV-1型毒株Lleida029_22（GenBank：PQ337361）分离自2022年12月西班牙加泰罗尼亚PRRSV疫情暴发中的血清样本。在本研究中，确保了细胞培养及病毒分离的条件，以达到最小的体外选择压力。

结果与讨论

通过系统发育分析，Lleida029_22毒株被确认与PRRSV-1亚型1谱系相关，显示出与高致病性毒株的同源性。体外复制特性分析表明，该毒株在PAM和PAM-KNU细胞中可有效复制，而在MARC-145细胞中未能维持感染。IM接种组猪只全面表现出重症症状和100%的死亡率，而IN接种组则展现出相对较低的死亡率与症状。

这些结果为我们的理解奠定了基础，强调不同感染途径对PRRSV致病表现的显著影响。通过这项研究，我们深入探究了PRRSV高致病性毒株的致病机制，旨在为未来疫苗开发及流行病监控提供实验依据。

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